判断HA-VSMC细胞是否污染，关键看培养基状态和显微镜下的细节。以下是具体方法：

一、肉眼观察

‌培养基颜色‌：正常为红色/粉色，若变橙色/黄色，可能污染或细胞过密。

‌培养基澄清度‌：浑浊或有絮状物提示污染。

‌细胞瓶身‌：裂缝会大幅增加污染风险。

二、显微镜观察

‌细菌污染‌：培养液浑浊变黄，镜下可见黑色细沙状颗粒。

‌真菌污染‌：培养液清亮但出现絮状物，镜下有细丝状菌丝。

‌支原体污染‌：培养液清亮，镜下有静止小黑点，细胞生长变慢。

‌黑胶虫污染‌：培养液清亮，镜下有黑色异物做布朗运动。

三、处理建议

‌真菌污染‌：丢弃污染细胞，彻底消毒。

‌细菌污染‌：用含抗生素的PBS清洗，加青霉素（100U/mL）和链霉素（100mg/mL）。

‌支原体污染‌：用清除剂培养2-3代，严重时丢弃。

‌黑胶虫污染‌：用专用清除剂处理。

四、注意事项

‌无菌操作‌：全程严格无菌，避免污染。

‌冻存‌：用90%血清+10%DMSO现配现用，液氮储存。

‌观察‌：定期检查细胞形态和pH值。