实验报告：

一、Acc-3(涎腺腺样囊性癌细胞)分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。

细胞特性：

1)组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞角蛋白-18(CK-18)免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

注意事项：

1、观察细胞zui好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X或20X物镜下。

2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。

4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们。

ZNF622 ELISA KitRat Gsk3a(Glycogen synthase kinase-3 alpha) ELISA Kit还原型辅酶I二钠盐组织甘油-3-磷酸脱氢酶-2（Glycerol-3-Phosphate Dehydrogenase-2）活性比色法定量检测试剂盒

ZNF658 ELISA KitRat HIF-1α(Hypoxia-inducible factor 1-alpha) ELISA Kit还原型辅酶I二钠盐细胞甘油激酶（Glycerol kinase）活性酶连续反应比色法定量检测试剂盒

ZNF645 ELISA KitRat 5-HETE(5-Hydroxyeicosatetraenoic Acid) ELISA KitN,N'-双(苄氧羰基)-1H-吡唑-1-甲脒组织甘油激酶（Glycerol kinase）活性酶连续反应比色法定量检测试剂盒

ZNF649 ELISA KitRat Ccl11(Eosinophil Chemotactic Factor) ELISA KitN,N'-双(苄氧羰基)-1H-吡唑-1-甲脒半乳糖基转移酶（galactosyl transferase）

ZNF419 ELISA KitRat 5-LO(Arachidonate 5-Lipoxygenase) ELISA KitN,N'-双(苄氧羰基)-1H-吡唑-1-甲脒动物多酚氧化酶（polyphenol oxidase；PPO）活性比色法定量检测试剂盒

ZNF549 ELISA KitRat TPO(Thrombopoietin) ELISA KitN,N'-二环己基碳二亚胺酵母多酚氧化酶（polyphenol oxidase；PPO）活性比色法定量检测试剂盒

ZNF443 ELISA KitRat Clu(Clusterin) ELISA KitN,N'-二环己基碳二亚胺细菌多酚氧化酶（polyphenol oxidase；PPO）活性比色法定量检测试剂盒

ZNF557 ELISA KitRat Cfd(Complement factor D) ELISA KitN-乙酰-DL-丙氨酸植物多酚氧化酶（polyphenol oxidase；PPO）活性比色法定量检测试剂盒

Nurr1/NR4A2 ELISA KitIFNA17/Interferon alpha 17/IFNA88  干扰素α17抗体四氢呋喃重楼皂甙E进口/国产ACCN1/BNaC1/ASIC2  脑钠通道蛋白1抗体含量：HPLC≥98%

ODF2L ELISA KitIFNA21/IFNA F  干扰素α21抗体2,4,6-三甲基苯甲酸重楼皂甙F进口/国产CD44/HCAM/PGP1  CD44抗体含量：HPLC≥98%

NWD1 ELISA KitIFNAR2/IFNABR  干扰素α受体2抗体2,4,6-三甲基苯甲酸乌金甙进口/国产BGP/Osteocalcin  骨保护蛋白/骨钙抗体含量：HPLC≥98%

NVL ELISA KitIFNA11/Limitin/Interferon alpha 11  干扰素α11抗体2,4,6-三甲基苯甲酸獐牙菜甙进口/国产ChRM3/Acetylcholine receptor(M3)  蕈型酰胆受体M3抗体含量：HPLC≥98%

NXN ELISA KitIFNA10/Interferon alpha10/Interferon alpha C  干扰素α10抗体雷公藤甲素豆腐果甙进口/国产MSH3  错配修复蛋白3抗体含量：HPLC≥98%

ODF3 ELISA KitOtoraplin/OTOR/Fibrocyte derived protein  纤维细胞源性蛋白三氧化钨石杉进口/国产Cystatin A  胱抑A/半胱氨酸蛋白酶抑制剂A抗体含量：HPLC≥98%

ODZ1 ELISA KitHSP10/CPN10  热休克蛋白10抗体三氧化钨川陈皮进口/国产SDF-1/CXCL12  质细胞衍生因子1抗体含量：HPLC≥98%

NXPH1 ELISA KitANGPTL6  血管生成素相关蛋白6抗体2,3,4,6-四-O-三甲基硅基-D-葡萄糖酸内酯告达亭甙元进口/国产Metallothionein 3  金属蛋白3抗体含量：HPLC≥98%

特性：

安全性：所有肿瘤和病转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需高压灭菌后方能丢弃。收到细胞后，在倒置镜下好是在4X物镜)观察整个细胞生长情况

（一）如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。

(二)如果细胞已长满，即可进行传代培养。具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用PBS（不含钙,镁离子）洗1-2次。

2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒放于37℃培养箱1-3分钟预热，之后翻转培养瓶10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。