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金牌会员第5
坏死梭杆菌坏死亚种菌种保藏方法
2020.11.05   点击918次

坏死梭杆菌坏死亚种菌种保藏方法:

1.斜面低温保藏法

产品仅用于科研将菌种接种在适宜的斜面培养基上,待菌种生长完全后,置于4℃左右的冰箱中保藏,每隔一定时间(保藏期)再转接至新的斜面培养基上,生长后继续保藏,如此连续不断。此法简便易行,容易推广,存活率高,故科研和生产上对经常使用的菌种大多采用这种保藏方法。

2.石蜡油封藏法

此法是在无菌条件下,将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的菌种斜面(或半固体穿刺培养物)上,石蜡油层高出斜面顶端lcm,使培养物与空气隔绝,加胶塞并用固体石蜡封口后,垂直放在室温或4℃冰箱内保藏。由于液体石蜡阻隔了空气,使菌体处于缺氧状态下,而且又防止了水分挥发,使培养物不会干裂,因而能使保藏期达1~2年,或更长。但此法不适合厌氧性细菌。

3.砂土管保藏法

适用于产孢子的放线菌、霉菌及形成芽孢的细菌,对于一些对干燥敏感的细菌如奈氏球菌、弧菌和假单胞杆菌及酵母则不适用。砂土管法兼具低温、干燥、隔氧和无营养物等诸条件,故保藏期较长、效果较好,且微生物移接方便,经济简便。它比石蜡油封藏法的保藏期长,约1~10年。

4.麸皮保藏法

此法以麸皮作为载体,吸附接入的孢子,然后在低温干燥条件下保存。适用于产孢子的霉菌和某些放线菌,保藏期在1年以上。因操作简单,经济实惠,工厂较多采用。

5.冷冻真空干燥保藏法

简称冻干法,通常采用保护剂制备拟保藏菌种的细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中,再在低温下快速将含菌样冻结,并减压抽真空,使水升华将样品脱水干燥,形成完全干燥的固体菌块。并在真空条件下立即融封,造成无氧真空环境,置于低温下,使微生物处于休眠状态,而得以长期保藏。常用的保护剂有脱脂牛奶、血清、淀粉、葡聚糖等高分子物质。

6.液氮超低温保藏法

以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂,在液氮超低温(-196℃)下保藏。其主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温,并在降到低温之前,使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来,以免膜内因自由水凝结成冰晶而使细胞损伤。此法操作简便、高效、保藏期一般可达到15年以上,是目前被公认的效的菌种长期保藏技术之一。


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