线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm) 活性计算:
(1) 按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
α-KGDH活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109
]÷(V样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
α-KGDH(nmol/min /g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109
]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=325×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活力单位。
α-KGDH 活性(nmol/min/104
cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109
]÷(500×V 样÷V 样总)
÷T=0.65×ΔA
V 反总:反应体系总体积,2×10-4
L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103
L / mol /cm;d:
比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,0.202 mL;
T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细
胞总数,500 万。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下
(1) 按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活性单位。
α-KGDH 活性(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109
]÷(V 样×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算:
单位的定义:每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活性单位。
α-KGDH 活性(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109
]÷(W× V 样÷V 样总)
÷T=650×ΔA÷W
(3) 按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADH 定义为一个酶活性单位。
α-KGDH 活性(nmol/min/104
cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109
]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=1.3×ΔA
V 反总:反应体系总体积,2×10-4
L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103
L / mol /cm;d:
96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入提取液体积,0.202 mL;
T:反应时间,2min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。