‌小鼠牙髓干细胞支原体防控的标准化操作流程(SOP)‌ 应覆盖预防、检测与处理全环节，以保障细胞健康和实验可重复性。

一、预防阶段：建立无菌屏障

‌操作环境‌

所有细胞操作必须在‌二级生物安全柜‌中进行，使用前开启紫外灯照射30分钟，内壁及台面用75%酒精擦拭。

操作者穿戴无菌手套、实验服和口罩，避免说话、走动干扰气流。

‌试剂管理‌

新到血清、培养基、胰酶等关键试剂必须进行‌预检‌：取样接种于无菌培养瓶，37℃孵育3天观察是否浑浊，或直接进行PCR检测。

推荐将大包装试剂‌无菌分装‌为小份使用，避免反复开盖引入污染。

‌耗材规范‌

使用‌带滤芯吸头‌、一次性无菌培养皿与离心管，杜绝外源微生物引入。

‌新细胞系隔离‌

所有外来或复苏细胞应单独培养并密切监测‌至少7天‌，确认无污染后再与其他细胞共用空间。

二、处理阶段：污染应对策略

‌轻度污染挽救‌

使用‌Plasmocin™‌(5 μg/mL)或‌BM-Cyclin‌处理7–14天，每3天换液一次。

处理结束后必须通过‌PCR法重新检测‌，确认清除后方可继续使用。

‌重度污染处置‌

若细胞增殖严重受抑、贴壁差、碎片多且检测持续阳性，‌建议直接丢弃‌。

丢弃后对培养箱、离心机、移液器等设备进行‌彻底消毒‌(75%酒精+紫外照射)。

‌抗生素使用提醒‌

常规添加青霉素-链霉素‌不能预防支原体污染‌，因其无细胞壁，对β-内酰胺类抗生素不敏感。

可考虑在高风险阶段短期使用支原体特异性清除剂作为预防性干预。

✅ 提示：建立“‌先检后用‌”原则是防止实验室大规模污染的核心策略。